蛋白质工程

<正> 随着科学技术的迅猛发展,人类对不同层次(分子、亚细胞、细胞、组织、器官乃至生命体本身)的生命过程的控制和利用已成为可能。作为生物功能的基本物质的蛋白质,由于其本身的多样性而为其多种应用提供了巨大潜能,人们一直在期待着对蛋白质功能的某种添加与除去的最终自主控制,并希望制造出比天然蛋白质性能更为优越的新     

《科学》：白血病如何破坏健康造血祖细胞

据08年12月19日的《科学》（Science）杂志报道说，在研究致命的白血病细胞在小鼠中是如何对循环系统进行攻击之后，他们已经找到了癌症细胞所支使的一种特别的蛋白质。这种蛋白质有可能成为一种治疗该种癌症的良好的标靶。Angela Colmone及其同僚为了发现这一秘密对罹患白血病的活体小鼠进行了实时成像检测，并对白血病细胞如何破坏健康的造血始祖细胞（HPCs）的功能（HPCs负责终身为机体提供健康的血细胞）进行了研究。     

姜老师信箱

<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第十二期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,向您请教渗透冲击法破菌的问题。我把E.coli培养到OD 0.5左右,加40%蔗糖冰上10min,然后离心直接加与原箘液1,2,3,4倍体积的蒸馏水,放置观察,一直没有观察到细菌破坏。我们的蛋白是在胞浆里面的,也看了一些文献,似乎渗透冲击更适用于表达在细胞膜和细胞壁之间的周     

气相色谱法对工程菌TEM—1降解率的定量分析

随着工业的发展,工业生产的废水对环境的污染日趋严重,生态平衡正受到严重的威胁,现已受到各国政府及科学家们的关注。利用工程菌处理工业污水和废水是近年新发展起来的新技术。本文报道了通过气相色谱法定量分析工程菌的降解率来考察外源基因在受体中的表达。     

四川农业大学成立未来农业与健康研究中心

经国家有关部门批准，四川农业大学未来农业与人类健康研究中心于近日正式成立，美国康乃尔大学营养学教授雷新根博士受聘担任研究中心主任。     

2,4-D和乙烯利对辣椒花柄离区DNA和蛋白合成的影响(简报)

乙烯利处理后0～4h，辣椒花柄离区DNA和蛋白质合成显著增加；250mg·L－1乙烯利处理后32h辣椒落花率达100％。2，4－D处理的离区DNA合成量降低；处理后0～4h促进离区蛋白质合成，4～24h蛋白质合成量逐渐降低；10mg·L－12，4D处理可抑制落花。     

体外重构STUB1介导α-1抗胰蛋白酶突变体Z蛋白泛素化修饰反应体系

α-1抗胰蛋白酶Z型突变体蛋白(α-1 antitrypsin Z-mutant protein, ATZ)是引发α-1抗胰蛋白酶缺陷症(α-1 antitrypsin deficiency, AATD)的主要原因,研究ATZ蛋白的泛素化修饰和降解对于治疗AATD具有重要意义。STUB1是一种重要的E3泛素连接酶,参与调节多种蛋白质的泛素化修饰。然而,STUB1是否参与ATZ的泛素化修饰尚未明确。本研究首先将ATZ和STUB1的编码基因克隆到pET28a质粒,构建了这2个蛋白的表达质粒。随后,将重组质粒转入大肠杆菌表达系统,在优化诱导条件实现了重组蛋白的异源表达。通过金属螯合亲和层析技术纯化得到目的蛋白,并通过蛋白质谱分析验证了其氨基酸序列的准确性。利用纯化的ATZ和STUB1重组蛋白,构建了一个体外泛素化修饰反应体系。实验结果显示,在ATP、E1泛素激活酶和E2泛素结合酶的协同作用下,STUB1成功催化了ATZ的泛素化修饰。本研究提供了一种体外获得Z型突变体ATZ纯化蛋白的方法,并确认了STUB1介导ATZ的泛素化修饰功能,推进了对α-1抗胰蛋白酶Z型突变体蛋白在细胞内降解过程的调控机制的理解。     

抗FLAG标签抗体在植物中的高效表达

植物生物反应器是一种新兴的重组蛋白表达系统,是分子农业的核心内容之一。本研究在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中表达了抗八肽(DYKDDDDK, FLAG)标签抗体,并对其进行纯化与鉴定。通过多次免疫小鼠获得高效价抗FLAG抗体并测出其编码序列,然后亚克隆至植物DNA病毒表达载体,最后通过农杆菌介导转染烟草叶片。经Western blotting检测了转染后2−9 d抗体的表达情况：3 d后FLAG抗体开始在烟草叶片中表达,5 d后表达量达到峰值,每千克鲜叶估计可表达66 mg FLAG抗体。抗体经过分离纯化后浓缩为1 mg/mL,按1:10 000稀释仍可识别1 ng/mL的抗原,表明植物生产的FLAG抗体具有高亲和力。植物生物反应器可用于生产高亲和力抗体,并具有简易、成本低和生产周期短等特点,具有很高的应用价值。